BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

目的：构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7，实时荧光定量PCR （QPCR）检测干扰效果。方法设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列（BCSC-1 shRNA1和BCSC-1 shRNA2）以及对照序列（NS），将其连接入载体PLKO．1-sp6-pgk-GFP中，得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落 PCR、双酶切和 DNA 序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒 Lipo-fectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7， QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO．1-sp6-pgk-GFP载体，DNA测序证实插入序列无误。 QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后， BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0．34±0．046和0．63±0．043，较空白对照组和NS组均有明显下降（P＜0．05），且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2（P＜0．05）。结论成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体，两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。