四氢小檗碱改善血管内皮细胞损伤的研究

目的:采用四氢小檗碱(tetrahydroberberine,THB)作用于模拟脑缺血再灌注损伤的糖氧剥夺模型(oxygen glucose deprivation,OGD)和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导血管内皮细胞损伤模型,探讨其对血管内皮细胞损伤的干预作用.方法:采用MTT比色法检测THB终浓度分别为0、2.5、5、10、20、40μg/mL对EA.hy926细胞存活率的影响.实验第I小组分组:正常对照组、OGD组、OGD+THB-10μg/mL组、OGD+THB-20μg/mL组、OGD+THB-40μg/mL组;实验第Ⅱ小组分组:正常对照组、LPS组、OGD+LPS组以及OGD+LPS+THB-20μg/mL组.通过荧光定量PCR检测实验I、Ⅱ处理小组的炎症相关因子如Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-6等基因的相对表达量,同时Western Blot分析检测IL-1β、HO-1蛋白表达量.结果:MTT法结果表明四氢小檗碱对EA.hy926细胞存活无影响即不存在细胞毒性.实验I、Ⅱ 处理小组的qPCR结果显示,OGD模型能明显通过下调Caspase-1、ASC、IL-1β与IL-6基因的表达发挥抗炎的应激保护作用;THB对于OGD模型的抗炎效果一般,但通过OGD+LPS组与OGD+LPS+THB-20μg/mL组对比发现THB也是通过下调炎症基因表达发挥抗炎效果的.Western Blot分析检测IL-1β蛋白表达量与qPCR结果一致,HO-1蛋白作为保护因子表达量与炎症因子荧光定量结果相反.结论:OGD模型可以提高细胞应激保护作用,四氢小檗碱通过下调Caspase-1、ASC、IL-1β与IL-6基因的表达,上调HO-1蛋白表达,抑制NLRP3炎症小体的活化发挥抗炎的作用.