血管内皮生长因子原核表达载体的构建及表达

目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)原核表达载体并诱导其表达蛋白,为后续迸行VEGF相关研究奠定基础.方法 通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到目的片段,将DNA片段克隆至带组氨酸标签的pET-30a(+)载体上;构建的重组质粒经过菌液聚合酶链式反应(PCR)及测序方法鉴定;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)迸行鉴定.结果 以HepG2细胞为模板扩增出大小正确的片段;构建的pET-30a-VEGF重组质粒经菌液PCR及DNA测序证实序列正确;考马斯亮蓝染胶和Western blot结果显示IPTG诱导表达的融合蛋白分子量正确且条带单一.结论 成功构建pET-30a-VEGF原核表达质粒,后续可迸行大量诱导表达用于肝癌的诊疗相关研究.