CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染

目的：构建高表达CXCR4慢病毒并转染MCF-7细胞，获得高表达CXCR4的MCF-7细胞。方法：RT-PCR法扩增CXCR4基因，构建重组质粒CXCR4／pSin-EF2，与psPAX2、pMD2G质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒，以空载体包装的病毒为对照，将包装慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。 RT-PCR和Western blot检测转染前后CXCR4基因和蛋白的表达，流式细胞术检测细胞表面CXCR4受体表达。结果：双酶切和测序结果证实重组质粒CXCR4／pSin-EF2构建成功，转染HEK293T细胞获得高滴度慢病毒，RT-qPCR和Western blot证实病毒转染MCF-7细胞中CXCR4表达量显著增高（P ＜0．05），流式测得CXCR4阳性细胞由26．78％升到99．29％，而MCF-7Vector细胞膜表面CXCR4表达量与未转染病毒MCF-7细胞无明显差异。结论：成功构建CXCR4慢病毒表达载体，获得CXCR4受体稳定高表达的乳腺癌细胞。