破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析

目的 寻求合适的溶剂,溶解破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶( TRAP)染色产物,筛选溶液的最适检测波长,检测溶液吸光度值.比较该方法与TRAP活性检测试剂盒法相关性,并评价该快速半定量分析法的稳定性与可靠性.方法 提取C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs),以1 ×104· mL－1均匀种入胶原I包被处理24孔板,随机分为4 组:10 nmoL/L PTH(1－34),100 nmoL/L PTH(1－34),1 μmoL/L PTH (1－34),10 μmoL/L PTH(1－34),给予甲状旁腺素[PTH(1－34)]刺激4 h后换成含10%胎牛血清完全培养基培养44 h,以4 h/44 h为1个周期,培养8 d后,进行常规破骨细胞TRAP染色,筛选合适的溶剂溶解,最终使用冰醋酸溶解TRAP原位染色产物,超声粉碎取上清,选取合适的波长检测吸光度( OD)值,此为冰醋酸溶解定量法.另一检测手段为目前常规使用的酶活性检测试剂盒法,试比较冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法两者的相关性.结果 常规破骨细胞原位TRAP染色后,筛选出冰醋酸的溶解效果最优.溶解后测定波长在550 nm左右吸收峰理想,并排除溶剂冰醋酸本身的干扰.随着PTH(1－34)浓度增高,表现出破骨效应的增加,TRAP的活性增加,两者的OD值相应增加.冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法存在显著正相关,Pearson相关系数r＝0.986(P＜0.05).结论 采用冰醋酸溶解定量法,并用550 nm 波长测定 OD值,可实现破骨细胞TRAP染色后的快速半定量分析.