miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制

目的 观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响, 并探讨其机制.方法 将宫颈癌细胞Siha分成6组, 分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A (CDKN1A) 基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A (CDKN1A组) 、pc DNA3. 1空载质粒 (pc DNA3. 1组) 、miR-130b mimics (miR-130b组) 、miR-130b阴性对照核酸 (NC组) , 共转染pc DNA3. 1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组) 、pc DNA3. 1和miR-130b mimics (pc DNA3. 1+miR-130b组) .TNF-α刺激细胞, 用彗星试验测定基因组DNA尾距, 流式细胞术测定磷酸化组蛋白2A变异体 (γ-H2AX) 蛋白; Real-time PCR、Western blotting法检测CDKN1A mRNA及其蛋白.分别将pc DNA3. 1/EGFP、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-wtUTR (野生型) 、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-mutUTR (突变型) 与miR-130b mimics或NC共转染Siha细胞, 测定报告基因荧光相对活性;以TNF-α和DNA损伤增强剂AZD2461刺激各组细胞, 用流式细胞术测定细胞凋亡水平.结果 与pc DNA3. 1组比较, CDKN1A组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平降低 (P均<0. 05) ;与NC组比较, miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率升高, CDKN1A mRNA、蛋白表达水平下降 (P均<0. 05) ;与pc DNA3. 1+miR-130b组比较, CDKN1A+miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率下降 (P均<0. 05) ;与共转染NC细胞相比, 共转染miR-130b mimics使野生型细胞荧光相对活性降低 (P <0. 05) , 而未改变突变型细胞荧光相对活性.结论 miR-130b通过直接靶定CDKN1A mRNA抑制其表达干扰宫颈癌细胞修复双链DNA断裂位点, 从而促进细胞凋亡.