磷蛋白32高表达人胶质瘤细胞株U251加入替莫唑胺、H2O2、乙醇后的增殖活性变化及其机制

目的 观察磷蛋白32(pp32)高表达人胶质瘤细胞株U251加入替莫唑胺、H2 O2、乙醇后的增殖活性变化,并探讨其可能机制.方法 pp32慢病毒转染U251细胞株,嘌呤霉素筛选pp32高/低表达稳定细胞株.其中,pp32高表达慢病毒稳转染的U251细胞作为32A组,pp32高表达阴性对照慢病毒稳转染的U251细胞作为32A-C组,pp32干扰慢病毒稳转染的U251细胞作为siA组,pp32干扰阴性对照慢病毒稳转染的U251细胞作为siA-C组;未经转染的U251细胞作为NC组.分别将100μg/mL替莫唑胺、0.15 mmol/mL H2 O2以及600 mmol/mL乙醇加入上述各组U251细胞0、12、24 h,采用CCK-8实验检测细胞光密度值(OD值,代表细胞增殖活性);上述药物加入U251细胞24 h,采用免疫细胞化学染色法检测增殖细胞核抗原(PCNA)(反映细胞增殖活性).取正常U251细胞株,加入0、50 ng/mL人pp32重组蛋白后,分别采用免疫细胞化学染色及Western blotting法检测该细胞内人类抗原R(HuR)蛋白.结果 成功建立了pp32高/低表达U251细胞株.与0、12 h相比,分别加入TMZ、H2 O2、乙醇24 h,U251细胞OD值降低(P均<0.05);分别加入TMZ、H2 O2、乙醇24 h,与NC、32A-C组比较,32A组细胞OD值升高,PCNA蛋白相对表达量增加(P均<0.05);与NC、siA-C组比较,siA组细胞OD值降低,PCNA蛋白相对表达量减少(P均<0.05).与未加入人pp32重组蛋白比较,加入人重组pp32蛋白后,U251细胞中HuR蛋白细胞核中的表达减少,细胞质中的表达增多;加入人重组pp32蛋白后,U251细胞质中的HuR蛋白相对表达量高于未加入人重组pp32蛋白(P<0.05),整体细胞中HuR蛋白相对表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论 pp32蛋白可使人胶质瘤细胞株U251替莫唑胺、H2 O2、乙醇作用后的增殖活性增强,其作用可能与促进HuR从细胞核向细胞质转移有关.