以脐带间充质干细胞为载体的靶向基因治疗系统联合5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的作用

目的 构建以人脐带间充质干细胞(HUMSCs)为载体的靶向基因治疗系统,观察该系统联合低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的治疗作用.方法 采用组织块接种法从新鲜无菌新生儿脐带中分离HUMSCs,利用PCR、重叠PCR、酶切、连接等分子生物学技术构建慢病毒表达质粒LentiR.E1A和腺病毒穿梭质粒pAd-hTERTp-IL24,并包装慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24.采用Transwell实验观察慢病毒和腺病毒共感染对HUMSCs向HepG2细胞趋化的影响.采用皮下接种的方法建立HepG2移植瘤模型,将荷瘤小鼠分成5组各5只,分别给予尾静脉注射PBS、HUMSCs、低剂量5-FU、慢病毒感染HUMSCs联用低剂量5-FU、双病毒共感染HUMSCs联用低剂量5-FU的治疗,比较各组的抑瘤效应.利用BD Annexin-Ⅴ-PE凋亡试剂盒检测腺病毒Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肝癌细胞凋亡情况. 结果 成功构建了慢病毒表达载体pLentiR.E1A和腺病毒表达载体pAd-hTERTp-IL24,并成功包装出了慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24.Transwell实验显示,慢病毒和腺病毒共感染HUMSCs向肿瘤细胞的迁移能力无明显改变.联合低剂量5-FU治疗裸鼠肝移植瘤中治疗组肿瘤体积较对照组减小(P<0.01).Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肿瘤微环境内的肿瘤细胞发生凋亡,其荧光强度明显强于Ad-Track+5-Fu组和5-Fu组.结论 成功构建了以HUMSCs为载体的靶向基因治疗系统,由HUMSCS.LentiR.E1A运载携带抑瘤基因的腺病毒Ad-hTERTp-IL24联用低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤有明显抑制作用.