转染 Smad3-siRNA 的活化肝星状细胞 Smad3表达及细胞外基质分泌量变化

目的：转染Smad3-siRNA的活化肝星状细胞（ HSCs） Smad3表达及细胞外基质分泌量变化。方法利用生物软件进行Smad3 mRNA模拟，选择合适的靶位点，使用pSilencer3．1-H1-hygro载体表达Smad3特异性siRNA。将Smad3-siRNA真核表达载体转染HSC-T6细胞株，将HSC-T6细胞接种到24孔培养板，待细胞生长融合达60％～80％后，每3孔为1组，共分为4组，HSC-T6组细胞未经过质粒转染；空白质粒组细胞经过不含Smad3-siRNA的空白质粒转染；1μg Smad3-siRNA转染组细胞经过含有1μg Smad3-siRNA的质粒转染；2μg Smad3-siRNA转染组细胞经过含有2μg Smad3-siRNA的质粒转染。应用RT-PCR法、Western blotting法分别检测Smad3 mRNA和蛋白，同时检测细胞上清胶原Ⅲ。结果成功构建siRNA表达克隆。 HSC-T6组、空白质粒组、1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组的Smad3 mRNA相对表达量分别为0．98±0．06、0．98±0．10、0．72±0．10、0．31±0．15，Smad3蛋白相对表达量分别为0．98±0．01、0．96±0．02、0．73±0．03、0．30±0．02，胶原Ⅲ含量分别为33．11±0．45、33．55±1．00、17．93±1．05、11．80±1．31，1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组分别与HSC-T6组比较，1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组分别与空白质粒组比较，1μg Smad3-siRNA组与2μg Smad3-siRNA组比较，P均＜0．05。结论在体外实验中真核表达载体Smad3-siRNA可有效地抑制HSCs中Smad3的表达，并可减少激活的HSCs分泌细胞外基质。