小鼠来源的OX40融合蛋白的表达鉴定及优化表达

目的：鉴定及优化表达小鼠来源的OX40融合蛋白。方法将已构建好的pET32a-OX40重组质粒DNA转入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，涂于含Amp平板筛选出阳性克隆，经Western blotting鉴定融合蛋白，对阳性克隆株通过改变异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）浓度、培养温度及时间条件，观察目的融合蛋白表达的变化。结果转化的质粒经Western blotting鉴定，证实有目的蛋白表达。当温度、时间不变时，IPTG分别为0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、2．0 mmol／L，7个不同浓度实验结果以0．4 mmol／L时蛋白表达量最高。当IPTG浓度、时间不变时，在20、25、30、35、40℃不同的温度点，以30℃时蛋白表达量最高。当温度、IPTG浓度不变时，1、2、3、4、5、6 h不同时间点，以4 h时蛋白表达量最高。结论小鼠来源的OX40融合蛋白在BL21细胞获得成功表达，并获得其最佳表达条件（IPTG浓度0．4 mmol／L、温度30℃、诱导4 h）。