重组人载脂蛋白A-Ⅱ在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定

目的 在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白A-Ⅱ具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白A-Ⅱ(rhApoA-Ⅱ).方法 通过逆转录聚合酶链反应(PCR)法从人肝组织钓取编码人ApoA-Ⅱ的cDNA,将其与pPICZα载体连接,构建真核分泌型重组质粒.重组质粒人ApoA-Ⅱ-pPICZ0经过Sac Ⅰ酶切线性化,然后转化毕赤酵母感受态细胞.经过酵母基因组鉴定,筛选重组工程菌,建立rhApoA-Ⅱ的毕赤酵母分泌表达体系,对rhApoA-Ⅱ进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验(Western blot)分析.结果 经PCR法克隆的人ApoA-ⅡcDNA序列与GenBank登录序列一致.还原电泳条件下,SDS-PAGE和Western blot分析均在分子量约8 700处出现特异性条带.结论 成功构建了人ApoA-Ⅱ-pPICZα表达载体,在毕赤酵母菌中高效分泌表达rhApoA-Ⅱ,为进一步研究其结构与功能提供了物质基础.