氧化型低密度脂蛋白刺激小鼠足细胞后的氧化应激效应和机制研究

目的 观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激小鼠足细胞后的氧化应激效应和信号通路的激活,探讨足细胞抗氧化能力变化的机制.方法 分别用50μg/ml ox-LDL、LDL刺激分化成熟的小鼠肾小球足细胞(ox-LDL刺激组、LDL刺激组),并设单纯以无血清培养基培养的足细胞为对照组,观察12、24 h足细胞的损伤情况及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.采用TUNEL法判断足细胞的凋亡情况,免疫荧光法及Western blot法观察足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达情况,间接免疫荧光法观察细胞骨架蛋白paxillin、F-actin的表达情况,Western blot法进一步检测两条信号通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的变化,分光光度法测定足细胞细胞质SOD的活性.结果 经LDL及ox-LDL刺激12、24 h的足细胞均未见凋亡,12 h 3组细胞nephrin的表达无明显差异,24 h ox-LDL刺激组nephrin表达明显下调、足突上的paxillin表达消失,F-actin重新分布.12 h ox-LDL刺激组及LDL刺激组的MAPK和GSK-3β活性无明显差异,24 h ox-LDL刺激组磷酸化的MAPK和GSK-3β比率显著增加.12 h ox-LDL刺激组足细胞SOD活性较对照组增加19.94%,ox-LDL刺激持续至24 h,SOD活性较对照组仅增加7.3%.结论 50 μg/ml ox-LDL刺激体外培养的分化成熟小鼠肾小球足细胞24 h,可导致nephrin显著下调,细胞骨架蛋白重构,磷酸化的MAPK、GSK-3β比率显著增加,提示MAPK、GSK-3β两条通路的激活可能导致nephrin表达下调和细胞骨架蛋白重构.氧化刺激早期可造成足细胞的SOD活性反应性升高并使足细胞免于氧化损伤.