双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠

目的：建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体（SRBⅠ）基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA，应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针，经PCR扩增后，在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术对结果进行验证，并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果仅在FAM通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因野生型小鼠，仅在CY5通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因敲除型小鼠，在两个通道都出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因杂合型小鼠。结果与DNA测序法吻合，检测野生型和突变型的灵敏度均达4×101拷贝/μL。结论新方法简单、快速、准确，适用于分型SRBⅠ基因敲除小鼠。