应用流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平敏感性的研究

目的 探究流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)利福平(Rifampicin,RFP)药物敏感性的可行性.方法 对结核分枝杆菌临床分离全敏株与耐RFP株菌悬液用12.5 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的RFP液作用3d、7d或10d后,经荧光素双醋酸酯(Fluorescein diacetae,FDA)染色;1.56 μg/ml、6.25 μg/ml、25.00 μg/ml、100.00 pg/ml的RFP液作用1d、3d、7d后经碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(Meanfluorescence intensity,MFI)值,并计算其敏感指数(实验管MFI/对照管MFI),依据受试者工作曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)统计各药物浓度及处理时间下FCM FDA鉴定MTB RFP敏感性的诊断性能,选定基于FDA和PI的FCM法鉴别MTB RFP敏感性的最佳条件与区分MTB RFP敏感或耐药的敏感指数界值.分别对95株和78株MTB临床分离株进行基于FDA和PI的FCM药物敏感性测定并与比例法药敏实验进行比较.结果 基于FDA的FCM检测MTB RFP敏感性的最佳条件是12.5 μg/ml的RFP处理7d,敏感指数界值为0.75,检测结果准确度为88.4％,灵敏度为90.2％,特异度为87.0％,与比例法比较差异无统计学意义(x2=0.364,P=0.549).基于PI的FCM检测,MTB RFP敏感性的最佳条件是1.56 μg/ml的RFP处理1d,敏感指数界值为1.12,检测结果准确度为84.6％,灵敏度为85.7％,特异度为83.7％,与比例法比较差异无统计学意义(x2=0.083,P=0.774 5).结论 基于FDA或PI的FCM法均可应用于MTB临床分离株的RFP敏感性检测.