少阳生骨方含药血清对Raw264.7细胞向破骨细胞分化的影响及机制研究

目的 研究少阳生骨方含药血清对Raw264.7细胞向破骨细胞分化的影响以及相关基因蛋白的变化,探讨少阳生骨方对破骨细胞的作用及其机制.方法 使用CCK8法检测不同浓度的少阳生骨方含药血清对Raw264.7细胞增殖的影响;通过RANKL诱导Raw264.7向破骨细胞进行分化,并加入不同浓度的含药血清进行干预.TRAP染色法观察TRAP阳性破骨细胞的形态并计数;RT-PCR检测破骨细胞中Ctsk、c-Fos和NFATc-1基因mRNA的表达.Western blot法检测破骨细胞中NF-κB p65蛋白磷酸化的表达.结果 (1)CCK8法检测发现,与对照组相比,少阳生骨方含药血清在干预时间为24h、48h、72h时,对各实验组Raw264.7细胞的增殖无显著性差异(P＞0.05).(2)与对照组相比,随着少阳生骨方含药浓度的增加,各实验组TRAP染色阳性的破骨细胞数量逐渐下降,当含药浓度为0.14g/mL、0.28g/mL、0.56g/mL时,差异具有统计学意义(P＜0.05).(3)RT-PCR检测发现,与空白组相比,加入50ng/mL RANKL诱导剂的对照组Ctsk、C-fos和NFATc1 mRNA的表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).随着少阳生骨方含药血清浓度的增加,Ctsk、C-fos、NFATc1的mRNA表达呈浓度依赖性下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).(4)Western blot检测法发现,与空白组相比,加入了 RANKL诱导剂的对照组NF-κBP65蛋白磷酸化呈现高表达,差异有统计学差异(P＜0.05);与对照组相比,实验组含药血清浓度为0.14g/mL、0.28g/mL、0.56g/mL时,随着浓度的增加,NF-κB P65蛋白磷酸化水平逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 (1)少阳生骨方可抑制Raw264.7细胞向破骨细胞分化,当少阳生骨方含药血清浓度为0.56g/mL时,抑制作用最强.(2)少阳生骨方抑制Raw264.7细胞向破骨细胞的分化与对NF-κB p65蛋白磷酸化的抑制相关.