小鼠Akt基因真核表达载体的构建及鉴定
Ningxia Medical Journal（2018）
摘要
目的 构建含有小鼠Akt基因以及绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1.方法 以小鼠卵巢RNA为模板,通过RT-PCR扩增Akt,并将其克隆到pDoubleEx-EGFP载体中.通过酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1.之后转染人卵巢癌上皮细胞SKOV-3.结果 经测序鉴定,构建的Akt基因序列与野生型Akt序列完全相符.将pDoubleEx-EGFP-Akt1转染进入人卵巢癌上皮细胞SKOV-3,观察到稳定转染后的细胞有明显绿色荧光蛋白表达.结论 成功构建含有小鼠Akt基因的真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1,为进一步研究Akt基因的功能提供初步的实验基础.
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