根结线虫雌虫ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以根结线虫雌虫DNA为基础,建立和优化稳定的ISSR-PCR反应体系.试验采用5因素、4水平的正交试验和单因子梯度优化相结合的方法.通过试验得到适用于根结线虫雌虫的25 μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为dNTPs 0.24 mmol/L、Mg2+2.1 mmol/L、Taq酶0.4 U、引物0.3 μmol/L、DNA 140 ng.经引物UBC835、UBC857对根结线虫雌虫最佳ISSR-PCR反应体系验证.该反应体系稳定、可靠,正交结合单因子试验可以建立满足后续试验要求的ISSR-PCR体系.