马铃薯栽培品种‘合作88’细菌人工染色体文库的构建与评价
Acta Horticulturae Sinica（2015）
摘要
以四倍体马铃薯栽培品种‘合作88’培养12～15 d苗龄的幼嫩叶片为试材,提取高分子量基因组DNA,利用限制性内切酶HindⅢ部分酶切后回收100～300kb片段,连接到载体CopyControlTMpCC1BACTM的HindⅢ位点上,构建了细菌人工染色体(BAC)文库.该文库约由850 000个克隆组成,空载率约2.08％,保存在1 700个混合池中,克隆插入片段平均大小约为90 kb,覆盖单倍型马铃薯基因组约85倍.随机挑取6个BAC克隆连续培养5d,提取DNA进行HindⅢ完全酶切检测,确认不同培养时间的BAC克隆的指纹图谱完全一致,表明文库较好的稳定性.BAC文库的构建为马铃薯重要农艺性状基因克隆、基因组测序以及比较基因组研究等奠定了基础.
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关键词
pathogen resistance,potato, bacterial artificial chromosome library
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