猪瘟病毒E2蛋白双抗体夹心ELISA定量方法的建立

本研究旨在建立定量检测猪瘟病毒(CSFV) E2重组蛋白的双抗体夹心ELISA方法.用CSFV WH303单克隆抗体包被96孔酶标板,用CSFV 1B6单克隆抗体连接HRP作为酶标抗体,以杆状病毒表达纯化的CSFVE2蛋白作为标准品蛋白,建立双抗体夹心ELISA定量方法.用SDS-PAGE方法检测标准品蛋白的纯度,BCA蛋白定量法定量标准品蛋白的浓度.稀释标准品至线性区间,绘制标准曲线.用棋盘法确定包被单克隆抗体和酶标抗体及标准品蛋白的最适稀释度.用批间重复和批内重复试验验证该方法的重复性和稳定性.SDS-PAGE结果显示,CSFV E2蛋白的标准品纯度＞95％,BCA蛋白定量法测定CSFV E2蛋白的标准品浓度为1.553 mg/mL.包被单克隆抗体的浓度为0.1 μg/mL,酶标抗体的最适稀释度为1∶400.CSFV E2蛋白标准品稀释浓度在2.43～77.65 μg/mL范围内有很好的线性关系,相关系数R2值在0.99以上.批间和批内重复性检测试验变异系数均＜15％.本试验成功建立了定量检测CSFV E2重组蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的重复性和稳定性,为CSFV E2蛋白的定量提供了有效方法.