不同毒力水貂阿留申病毒在猫肾细胞中的增殖特性及凋亡特性的比较研究

试验旨在对不同毒力水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)在猫肾细胞(feline kidney cell, CRFK)中的增殖规律及其诱导细胞凋亡情况进行比较研究.将标准毒株AMDV-G及分离到的野毒株AMDVDL124、AMDV-DL125、AMDV-QD2、AMDV-QD3、AMDV-ZJ3接种CRFK细胞,应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、TCID50测定技术研究病毒在细胞中的复制及表达情况,同时检测病毒诱导的细胞凋亡情况.间接免疫荧光结果显示,5株野毒株荧光着色趋势差异不大,均在感染后12h出现荧光,随感染时间延长荧光增多,AMDV-G荧光出现时间比野毒株晚,但病毒感染后72 h几乎所有细胞均出现荧光;实时荧光定量PCR结果显示,基因组复制趋势大致相同,AMDV-DL125感染后3h复制开始,AMDV-G感染后24 h复制才开始并呈快速增长趋势,但感染后72 h均达到峰值.TCID50检测结果表明,0～12 h为病毒感染潜伏期,AMDV-G感染后60 h达到峰值,野毒株均在感染后72 h达到峰值,但是6株病毒均能在感染后48～72 h维持较高的感染滴度,其后随细胞崩解而降低.SPSS 23.0统计软件分析凋亡检测结果显示,与对照组相比,野毒株感染细胞后2～12 h诱导细胞凋亡差异显著(P＜0.05),AMDV-G诱导细胞凋亡差异明显低于野毒株,但是诱导细胞凋亡时间较野毒株长,在感染后24 h仍对细胞凋亡有较明显的诱导作用,但是各病毒诱导的细胞凋亡主要集中在2～12 h.该结果为AMDV的培养、鉴定及致病机理研究提供一定参考.