猪圆环病毒2型CAP蛋白在flashBAC杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

试验旨在通过真核表达系统表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)CAP 蛋白。以 PCV2 TZ0601株为模板,将PCV2 CAP全基因及CAP去除信号肽的基因编码序列克隆至pOET3载体上,酶切与测序鉴定正确后,将重组质粒 pOET3-CAP及 pOET3-CAP-X转染 sf9昆虫细胞。采用 flashBAC杆状病毒表达系统表达PCV2 CAP及去除信号肽的CAP蛋白,通过间接免疫荧光法、SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定目的蛋白的表达。结果表明,真核表达质粒 pOET3-CAP 及 pOET3-CAP-X构建成功,目的基因在 sf9昆虫细胞中高效表达,得到的蛋白经 SDS-PAGE和 Western blotting鉴定,在25~35 ku处有蛋白条带,表达的蛋白质可被 PCV2阳性血清识别。试验结果为进一步制备PCV2亚单位疫苗及诊断抗原试剂盒的研发奠定了基础。