猪补体C5a蛋白表达、纯化和生物学活性检测

参照NCBI中公布的猪补体C5a蛋白氨基酸序列及猪C5蛋白的全基因序列,通过生物信息学分析获得猪C5a蛋白基因全长,为222 bp,该序列定向插入原核表达载体pET-28a中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting检测分析表明,C5a基因获得表达,重组蛋白大小为10 000.利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化后,体外细胞试验测定重组C5a蛋白生物学活性.结果显示,成功构建了pET-28a-C5a重组质粒,纯化获得目的蛋白纯度达到90％以上,质量浓度为2.5 g/L.细胞试验检测到C5a具有趋化和诱导中性粒细胞的活性.本研究为揭示猪C5a参与炎症过程的作用机制及制备C5a拮抗剂奠定了基础.