高效抗猪瘟病毒shRNA的筛选
Chinese Journal of Veterinary Science（2014）
摘要
为降低RNAi技术的毒副作用,筛选高效抑制猪瘟病毒复制的shRNA序列,根据有关报道构建了荧光报告系统shRNA筛选平台.该平台以9种抑制效率分别为强、中、弱的shRNA筛选载体作为参照,结合荧光报告系统进一步量化shRNA的抑制效率.根据2种已知体外有效抑制猪瘟病毒复制的siRNA-N2、siRNA-NS5B,分别设计得到shRNA-N2、shRNA-NS5B表达载体,继而采用高效、高灵敏度的shRNA筛选平台对这2种shRNA进行了检测,结果显示单拷贝情况下,shRNA-N2抑制靶序列效率较强,shRNA-NS5B抑制效率弱.本试验通过新策略大大提高了shRNA干扰效率检测的灵敏度,为采用shRNA转基因克隆动物进行抗病育种的研究提供了保障.
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