柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析

蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌,多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2,ppGalNAc-T2)是O-糖基化反应的限速酶.基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途径.为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)蛋白质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用,对EtppGalNAc-T2基因进行了克隆,并检测其在E.tenella不同发育阶段的表达动态.根据EuPathDB中所预测EtppGalNAc-T2基因序列设计引物,以RT-PCR方法扩增获得EtppGalNAc-T2的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p l进行诱导表达.提取E.tenella广东株未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA,以qRT-PCR法检测EtppGalNAc-T2转录水平的动态变化.结果表明,EtppGalNAc-T2的全长ORF为1 983 bp,编码660个氨基酸,在E.coli Transetta (DE3)可溶性表达.qRT-PCR结果显示,EtppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异,子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵囊则几近不能检出.结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础.