牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性.通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-d0,重组质粒经Pme Ⅰ酶切线性化后电转化宿主菌GS115.转化子经100 μg· mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达.结果表明:SDS PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21 ku,推测表达产物发生了一定程度的糖基化.细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性,达到5.72×106 U· mg-1.这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础.