鸭补体调节因子H的原核表达及多克隆抗体制备

Xiang-li WANG,De-long LI,Jiu-long GU,Hai-lan LIU, Ya-na MENG,Si-huai CHEN,Fa-shu TANG,Ji-xiang LI

Progress in Veterinary Medicine（2019）

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摘要

为制备鸭补体调节因子H(CFH)的多克隆抗体,从健康雏鸭的肝脏组织中提取总RNA及反转录合成cDNA,PCR扩增补体调节因子H基因的2个片段H1和H2,插入到载体pMD19-T,测序正确后,将目的基因分别克隆至原核表达载体pCold-TF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达蛋白,重组蛋白经SDS-PAGE检测,镍柱亲和层析纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.结果表明,成功构建重组表达质粒pCold-TF-H1和pCold-TF-H2,SDS-PAGE检测重组蛋白为可溶性表达,TF-H1和TF-H2多克隆抗体效价均超过1:10000.所制备的多克隆抗体可以为进一步研究鸭CFH的功能奠定基础.

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