寨卡病毒结构蛋白基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

寨卡病毒(ZIKV)是一种重要的人兽共患病病原.为了在原核表达系统表达ZIKV C、prM和E蛋白并制备相应多克隆抗体,本研究首先对ZIKV C、prM和E蛋白基因序列进行密码子优化,合成后克隆至pMAL-c5x载体中,重组质粒转化于E.coliER2523,IPTG诱导表达产物用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定并通过MBP亲和层析柱进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔,制备C、prM和E蛋白的兔源多克隆抗体;用IFA和Western blot检测血清抗体效价及特异性.结果 显示:本研究利用原核表达系统成功表达了ZIKV C、prM和E蛋白,经过MBP亲和层析柱纯化后获得高纯度的目的蛋白;将ZIKV C、prM和E蛋白免疫新西兰大白兔后均诱导产生特异性多克隆抗体,间接免疫荧光试验表明所制备多克隆抗体均能与ZIKV结合,IFA效价分别为1∶1600,1∶1600和1∶3200;Western blot显示制备的多克隆抗体能特异性识别ZIKV C、prM和E蛋白.该研究结果为进一步开展ZIKV相关研究奠定了基础.