猪δ冠状病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用

为了快速准确地检测猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),本研究根据PDCoV基因序列保守区设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,建立了一种特异性检测PDCoV的TaqMan-MGB荧光定量方法.结果 显示,该方法特异性良好,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型等的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在3.15×108～3.15×101 copies/μL范围内具有良好的线性关系;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.25％～1.06％和0.58％～1.27％;对临床样品的检测结果显示,本研究建立的荧光定量检测方法对PDCoV的阳性检出率(40％)高于常规PCR方法对PDCoV的阳性检出率(31.7％).该方法的建立为PDCoV的实验室鉴别诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段.