橙黄网孢盘菌凝集素的表达及其抗血清的制备

橙黄网孢盘菌凝集素(Aleuria aurantia lectin,AAL)是橙黄网孢盘菌中可与L-岩藻糖特异性结合的一种凝集素,具有广泛的生物学功能,但其天然来源较为局限.为了获得大量AAL并用于后续研究,本研究首先合成了密码子优化后的AAL编码基因并克隆至原核表达载体pMAL-c4X,将重组质粒转化于E.coli BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定,采用MBP亲和层析柱纯化融合蛋白并经肠激酶消化获得AAL单体蛋白.将纯化后的AAL与佐剂混合后免疫新西兰大白兔,制备其家兔源多克隆抗血清.对AAL多克隆抗血清用ELISA、IFA和Western-blot验证其反应原性.结果,本研究利用原核表达系统成功表达了AAL蛋白,经过MBP亲和层析柱纯化后获得高纯度的目标蛋白.将AAL蛋白免疫新西兰大白兔后获得了高效价的多克隆抗血清;IFA和Western-blot分析结果显示,本研究制备的AAL多克隆抗血清特异性高、敏感性好;ELISA滴定结果表明,本研究制备的AAL多抗稀释至1∶1 600时仍具有良好的反应性.上述结果表明,本研究制备的AAL及其多克隆抗血清为进一步开展AAL的生物学功能研究奠定了坚实的物质基础.