Bmo-miR-2771对家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用

微小RNA (miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达.研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmSer-1)转录后表达有关的miRNA (Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息.首先从miRBase 21数据库中获得全部成熟体Bmo-miR,通过生物信息学分析筛选到一个对BmSer-1有潜在调控作用的Bmo-miR,命名为Bmo-miR-2771.设计茎环引物,采用半定量RT-PCR方法检测Bmo-miR-2771及其预测靶基因BmSer-1在家蚕5龄3d幼虫头部、脂肪体、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、中肠等组织器官以及血淋巴细胞中的表达水平,结果显示Bmo-miR-2771特异性地在中部丝腺中表达,并且靶基因BmSer-1在中部丝腺的相对表达量也明显高于其他组织.将构建的表达Bmo-miR-2771的重组质粒pcDNA3.0(ie1-egfp-pri-miR-2771-SV40)和表达BmSer-1 3'-UTR的重组质粒pGL3(A3-1uc-Ser-1 3'UTR-SV40)共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,并以共转染pcDNA3.0(ie1-egfp-SV40)和pGL3(A3-1uc-Ser-1 3'UTR-SV40)的BmN细胞为阳性对照,以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,检测荧光素酶活性,结果显示实验组的荧光素酶活性相对于阳性对照组显著降低(P＜0.05),从细胞水平证实了Bmo-miR-2771对BmSer-1基因表达具有负调控作用.