柔嫩艾美耳球虫组蛋白去乙酰化酶2A基因的克隆表达及转录动态分析
Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2016）
摘要
为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组蛋白去乙酰化酶2A (EtSir2A)的生化功能及其对生活史发育的潜在调节作用,以柔嫩艾美耳球虫甘肃株为例,检测其在不同发育阶段表达量的差异.以基因组数据预测的编码序列为模板设计引物,采用RT-PCR的方法扩增得到EtSir2A的全长ORF,构建pMAL-C2X-EtSir2A重组表达质粒并进行原核表达;提取未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段/时期的总RNA,采用qRT-PCR方法检测EtSir2A的转录动态变化.测序结果显示,克隆的EtSir2A ORF序列全长909bp,编码302个氨基酸,并能在大肠杆菌原核系统中成功表达;qRT-PCR结果显示,EtSir2A在不同发育阶段mRNA转录水平差异显著,在未孢子化卵囊阶段最高,第二代裂殖子阶段最低.结果为进一步研究EtSir2A功能和开发新型抗球虫药物提供了数据基础.
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