装甲RNA在牡蛎中诺如病毒4种RNA提取方法比较研究中的应用

RNA提取是诺如病毒检测的关键步骤,而目前贝类中诺如病毒RNA提取、检测方法的比较与评价常囿于缺乏量值明确、无生物安全隐患的标准样品作为参考依据.本研究将前期制备的GⅡ型诺如病毒装甲RNA (3.0×1010拷贝)作为标准样品,人工污染牡蛎(Ostrea gigas tnunb)消化腺匀浆物,用4种常见RNA提取方法:TRIzol试剂、Viral RNA Kit、High Pure Viral Nucleic Acid Kit、柱式病毒RNAOUT试剂盒,分别提取RNA,经实时荧光RT-PCR检测后,利用标准曲线进行定量分析,分别计算4种方法对装甲RNA的回收率.结果 显示,对于匀浆样本,TRIzol法对装甲RNA的回收率最高(6.80±0.89)％,显著高于Viral RNA Kit (4.51±2.28)％,二者的回收率又显著高于HighPure Viral Nucleic Acid Kit (0.24±0.05)％与柱式病毒RNAOUT试剂盒(0.11±0.02)％ (P＜0.05);对于冻干样本,Viral RNA Kit对装甲RNA的回收率最高(8.71±0.17)％,显著高于TRIzol试剂(7.12±0.64)％,二者的回收率又显著高于High Pure Viral Nucleic Acid Kit (0.33±0.12)％与柱式病毒RNAOtUT试剂盒(0.06±0.01)％(P＜0.05).研究表明,TRIzol试剂与Viral RNA Kit对牡蛎消化腺样本中人工添加的装甲RNA均有良好的回收效果,同时也提示装甲RNA可作为一种良好的标准样品用于不同RNA提取试剂盒方法的评价与比较研究.