传染性鲑鱼贫血症病毒实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立

根据ISAV的基因保守序列，利用LAMP Designer软件设计了6条引物，采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测，优化了反应条件，分析了所建立方法的特异性和灵敏度，并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明，该方法最适反应温度为64℃，反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高，检测限为78.4 fg RNA，比常规RT-PCR灵敏度高100倍，与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当；特异性好，与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病毒没有交叉反应。结果表明，本研究建立了 ISAV 的实时荧光环介导等温扩增检测方法，实验能对整个扩增过程进行实时监测，提高检测灵敏度的同时，防止由于开盖跑电泳或加染料而导致的污染。