shRNA下调家蚕细胞系BmCREB的表达

shRNA(short hairpin RNA)是一种干扰基因表达、研究基因功能的有效方法.CREB(cAMP response element binding protein)是真核生物重要而又保守的转录调控因子,参与许多生理功能的调节.作者前期的研究发现,家蚕CREB (BmCREB)的表达与家蚕滞育的诱导密切相关.为进一步阐明BmCREB调控家蚕滞育的分子机制,利用pMD18-T质粒构建BmCREB的干扰质粒pMD 18-U6-shRNA,转染家蚕卵巢细胞系(BmN),对其下调BmCREB的表达进行研究.结果表明,在BmN细胞系中转染1μg shRNA,72 h后能有效地下调BmCREB蛋白的表达量,最高干扰效率达63.0％.不同干扰片段shRNA质粒的干扰效果差异很大,其中T-227的干扰效果最好.这些结果为进一步利用shRNA方法在家蚕体内下调基因表达,研究BmCREB基因与家蚕滞育的关系奠定基础.