猪肺炎支原体竞争定量 PCR检测方法的建立及初步应用

[目的]本试验旨在探索一种对猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）培养物中的支原体进行快速检测的竞争定量 PCR方法。[方法]设计一对Mhp特异性引物，检测Mhp培养物；又根据支原体种属保守基因序列设计一对引物，通过酶切缺失法构建竞争模板，其携带与目的片段相同的引物结合区。[结果]以一系列稀释的竞争模板的对数值为横坐标（X轴），竞争模板和目标模板扩增产物的光密度比值的校正值的对数值为纵坐标（Y轴）绘制标准曲线，根据 Y=0所对应的竞争模板的量推算求得支原体的拷贝数。以变色单位的对数值为 X轴，支原体的拷贝数为 Y轴，绘制出标准曲线，两者之间高度相关。[结论]成功建立了一种快速测定 Mhp培养物中支原体量的竞争PCR方法。