per 1,per23′UTR 双荧光素酶报告基因重组质粒的构建

构建了包含目的片段小鼠节律基因 per1,per23′UTR 全长的重组质粒,为初步分析转录后可能调控 per1, per2基因的 miRNAs 提供了有效手段。用反转录试剂盒将从小鼠肝脏组织提取的 RNA 反转录得到 cDNA,以获得的cDNA 为模板 PCR 扩增 per1,per23′UTR 全长,经回收纯化、酶切后将目的片段定向克隆到 PGL3-promoter 质粒上,再经转化扩增挑取克隆进行菌落 PCR,对获得的阳性克隆进行酶切鉴定并测序。PCR 产物鉴定结果表明,目的片段 per1, per23′UTR 序列扩增成功；菌落 PCR 及单酶切鉴定结果表明,per1,per23′UTR 已插入 PGL3-promoter 载体中；测序结果表明,per1,per23′UTR 插入序列,插入方向正确。per1,per23′UTR 双荧光素酶报告基因重组质粒的成功构建为进一步研究节律基因转录后的调控机制奠定了基础。