鲢鱼重组Cystatin及其酶解产物对草鱼冷藏肉片优势腐败菌的抑制作用

首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和中间气单胞菌(Aeromonas media)的抑菌活性.结果表明,酶解6h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好.再利用凝胶过滤高效液相色谱(TSK-GEL G2000SWXLHPLC)和双向电泳对6h酶解产物进行分离纯化分析.发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXL HPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,pI值为6.5.最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段(31 QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81 NPSIEQVIQ89)且含有Cystatin特征序列QVAAG.结果提示,Cystatin蛋白(完整序列分子质量12～14 ku)内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段.