棘孢青霉右旋糖酐酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达

以右旋糖酐酶产生菌棘孢青霉F1001基因组为模板反转录合成右旋糖酐酶的cDNA(dex),基因全长1866 bp,根据毕赤酵母密码子偏好性优化dex序列获得优化右旋糖酐酶基因(opt-dex),分别构建dex-pPICZαA和opt-dex-pPICZαA重组质粒,电击转入毕赤酵母X33中构建重组子.通过蓝色右旋糖酐T-2000平板以及摇瓶发酵筛选获得产右旋糖酐酶的重组酵母菌株.重组酶的酶学性质分析显示,重组酶分子质量65 kDa、最适pH 5.0、最适温度35℃,专一作用于α-1,6糖苷键.在摇瓶水平上对重组毕赤酵母表达条件进行优化,优化培养条件为培养温度25℃、初始pH 5.0、每24 h甲醇添加量1％(体积分数)、每24 h山梨醇添加量5 g/L、吐温-80添加量4 g/L、摇瓶装液量50 mL/500 mL锥形瓶,优化后的重组右旋糖酐酶分泌表达酶活力提高到240.74 U/mL.重组酵母X33是一株适合外源表达棘孢青霉右旋糖酐酶基因的工程菌,该重组酶可替代棘孢青霉右旋糖酐酶直接应用于工业生产催化制备右旋糖酐.