食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用

目的：建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法：用1-（4-异硫氰苄基）乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸（1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid，iEDTA）鳌合镉离子合成Cd2＋-iEDTA半抗原，异硫氰酯法制备免疫原Cd2＋-iEDTA-牛血清白蛋白（bovine serum albumin， BSA）和包被原Cd2＋-iEDTA-鸡卵清蛋白（ovalbumin，OVA），电感耦合等离子体发射光谱法和聚丙烯酰胺凝胶法进行鉴定；用Cd2＋-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠，细胞融合技术筛选Cd2＋-EDTA单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备Cd2＋-EDTA mAb；应用Cd2＋-EDTA mAb建立Cd2＋残留胶体金免疫层析快速检测方法（Cd2＋-Strip），并测定其性能。结果：免疫原偶联成功，Cd2＋-iEDTA-BSA中BSA与Cd2＋的含量分别为7.1 mg/mL和191.7μg/mL；筛选出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株杂交瘤细胞，经9次传代分泌抗体稳定，亲和力最高的2E10G9株亲和常数（Ka）为7.58×108 L/mol，对Cd2＋-iEDTA的半数抑制浓度为16.3μg/L，与Hg2＋-EDTA的交叉反应（cross-reaction，CR）率为18.6%，与其他重金属离子无CR；Cd2＋-Strip的检测时间为10 min，检出限为5μg/L，其检测结果与竞争ELISA试剂盒（Cd2＋ ELISA-Kit）、电感耦合等离子体发射光谱法符合率为100%。结论：制备出了亲和力高、特异性强的Cd2＋ mAb，建立了灵敏、特异、快速、简便的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。