南极磷虾过敏原的超高效液相色谱-飞行时间质谱方法检测

本研究建立了一种基于高分辨质谱的南极磷虾过敏原检测方法:使用Folin-酚法测定蛋白浓度,采用测序级胰蛋白酶对南极磷虾蛋白进行酶解,经超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对肽段进行分离检测,结合NCBI蛋白数据库和计算机检索对酶解产物进行鉴定,并利用Skyline生物信息学软件进行虚拟酶解,结合三重四极杆质谱对酶解肽段进行验证,鉴定出了南极磷虾中两种主要的过敏原即原肌球蛋白和精氨酸激酶,对应肽段分别为74和44条.该方法灵敏度强,准确度高,操作简便.与传统生物学方法ELISA和PCR法鉴定过敏原相比大大降低了假阳性结果,直接对过敏原蛋白进行鉴定,提高了检测效率,为食品中过敏原的检测提供了更为有力的手段,也为日后过敏原的消减提供了一定的理论基础.