海洋细菌Pseudoalteromonas sp.NJ631胶原蛋白酶的克隆与表达

对交替假单胞菌Pseudoaheromonas sp.NJ631基因组中潜在的胶原蛋白酶基因进行克隆与表达,并鉴定重组蛋白PNJC的酶活力.根据NJ631基因组序列草图,利用基因组信息发掘方法获得胶原蛋白酶功能提示的编码基因,进而利用高效表达质粒pET28a构建重组表达系统.经IPTG诱导表达、亲和层析纯化获得重组蛋白纯化产物.以不溶性Ⅰ型胶原蛋白为底物,测定胶原蛋白酶酶活力.对Pseudoaheromonas sp.NJ631基因组信息挖掘,从中发现一条疑似编码胶原蛋白酶的基因序列,命名为Pnjc.该基因全长1 359 bp,GC含量45.62％,编码由452个氨基酸残基组成的约51 000大小的胶原蛋白酶.SDS-PAGE检测表明,胶原蛋白酶PNJC在0.2 mmol/L的IPTG诱导下得到高效表达.经过亲和层析获得纯化重组蛋白PNJC,蛋白质质量浓度约为1 mg/mL.酶活检测表明,PNJC的酶活力为160.34 U/mg,为标准品的70.48％.PNJC高酶活力表明,Pseudoaheromonas sp.NJ631来源的胶原蛋白酶具有重要的研究价值与工业开发潜力.