Myriocin抑制脂质诱导的整合应激反应延缓ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展研究

目的 探讨Myriocin对高脂饮食诱导的整合应激反应的影响及作用机制.方法 18只ApoE-/-小鼠随机分为高脂饮食+磷酸盐缓冲液(对照组,9只)或高脂饮食+磷酸盐缓冲液+ Myriocin (Myriocin组,9只)两组,12周后测定血清脂质[总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇],流式细胞术测定淋巴细胞抗原6复合体(Ly-6c)high亚型单核细胞比例,HE染色测定主动脉窦斑块和脂质坏死核相对面积,免疫荧光染色观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定炎症反应相关分子[炎性因子白细胞介素-1β和6(IL-1β和IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和抗炎性因子IL-10]和整合应激反应相关分子[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、活化转录激活因子4和6(ATF4和ATF6)、内质网应激相关促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)和Caspase12] mRNA表达,Western blotting法测定整合应激反应相关蛋白[eIF2α、ATF4、肌醇依赖酶1α(IRE1α)和磷酸化IRE1α、p65核因子-κB(NF-κB)和磷酸化p65 NF-κB、Caspase 12和活化型Caspase 12]表达水平.结果 (1)经Myriocin灌胃12周后,小鼠血清LDL-C水平降低(t=2.830,P=0.012).(2)流式细胞术分析,经Myriocin灌胃8周后,小鼠Ly-6chigh亚群单核细胞比例下降(t=2.866,P=0.011).(3)HE染色观察,Myriocin组小鼠斑块面积小于对照组,在距主动脉瓣200和300 μm处,Myriocin组斑块面积小于对照组(t=2.281,P=0.045;t=3.506,P=0.003),Myriocin组小鼠脂质坏死核相对面积亦小于对照组(Z=-2.870,P=0.004).(4)免疫荧光染色观察,Myriocin组小鼠MCP-1水平低于对照组.实时荧光定量PCR显示,Myriocin组小鼠IL-1β mRNA(t=3.968,P=0.005)、TNF-α mRNA(t=7.696,P=0.000)、ICAM-1 mRNA(t=3.294,P=0.013)、VCAM-1 mRNA(t=5.449,P=0.001)和VEGF mRNA(t=2.574,P=0.037)表达均降低,IL-10mRNA升高(t=-3.132,P=0.017).(5)实时荧光定量PCR显示,Myriocin组小鼠PERK mRNA(t=4.174,P=0.004)、eIF2α mRNA(Z=-2.692,P=0.007)、ATF4 mRNA(t=3.342,P=0.012)、ATF6 mRNA(t=5.841,P=0.001)和Caspase12 mRNA(t=7.270,P=0.000)表达降低.(6)Western blotting检测,Myriocin组小鼠eIF2α(t=2.175,P=0.047)、ATF4(t=2.923,P=0.011)和磷酸化p65 NF-κB/总p65 NF-κB比值(t=2.909,P=0.011)下降.结论 鞘脂抑制剂Myriocin可以抑制高脂饮食诱导的整合应激反应和炎症反应,延缓ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展.