脂联素调控微小RNA221/金属蛋白酶组织抑制因子3信号对高糖环境下小鼠肾系膜细胞增殖的抑制作用

目的 探讨脂联素通过微小RNA221(miR-221)靶向调控金属蛋白酶组织抑制因子3(Timp3)基因对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞增殖的影响及作用机制.方法 在体外高糖条件下培养小鼠肾系膜细胞,分别加入脂联素以及转染miR-221抑制物、miR-221模拟物、小干扰RNA-Timp3(Si-Timp3)等干预因素.根据实验目的及干预因素不同将细胞分组为:正常对照组、高糖组、高糖+脂联素组、高糖+miR-221抑制物转染组及转染对照组、Si-Timp3转染组及转染对照组、miR-221模拟物转染组及转染对照组、高糖+脂联素+miR-221模拟物转染组及转染对照组.噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析miR-221、Timp3的表达水平,Western blotting法检测Timp3的蛋白表达,荧光素酶报告基因实验检测Timp3的3'-UTR活性.两组间比较采用t检验.结果 高糖组促进小鼠肾系膜细胞增殖明显,上调miR-221和抑制Timp3的表达(分别为3.20±0.28比1、0.67±0.07比1,t=13.69、8.35,均P<0.05),而脂联素加入后该作用减弱(t=7.60、4.12,均P<0.05).与高糖+miR-221抑制物对照组比较,转染miR-221抑制物后,Timp3的mRNA表达水平上调(0.78±0.03比0.38±0.04,t=14.57,P<0.05),细胞增殖减弱.与Si-Timp3对照组比较,转染Si-Timp3后,细胞增殖活性增强(1.72±0.06比1.04±0.12,t=8.76,P<0.05).与高糖+脂联素+miR-221 minic转染对照组比较,加入脂联素及转染miR-221模拟物后,Timp3的mRNA表达水平下降(0.72±0.09比1.40±0.06,t=10.93,P<0.05),细胞增殖加强.结论 高糖是诱导小鼠肾系膜细胞增殖、上调miR-221水平、抑制Timp3基因表达的重要因素,脂联素可逆转该作用,其机制可能是通过miR-221/Timp3途径,靶向负调控Timp3基因的表达来实现的.