猪圆环病毒2型REP蛋白的原核表达及免疫原性鉴定

[目的]开发和研制鉴别猪圆环病毒疫苗免疫和野毒感染的ELISA检测试剂盒.[方法]根据NCBI数据库录入的2型猪圆环病毒(porcine circovirus 2,PCV-2)REP蛋白序列(GenBank登录号为KX828581)设计引物,利用PCR扩增REP蛋白全长基,构建原核表达载体pET-28a-rep,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达.[结果]经过SDS-PAGE分析,获得了大小约40 ku的目的蛋白,与理论大小相一致.重组蛋白经镍柱纯化后重组蛋白浓度为40μg/mL,纯度约95％.Western Blot及ELISA鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.[结论]鉴于该重组蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该重组蛋白可为开发区分猪圆环病毒2型疫苗免疫和野毒感染的检测试剂盒奠定基础.