巢式-荧光定量PCR技术快速检测生殖支原体

目的 建立生殖支原体巢式-荧光定量PCR快速检测技术.方法 针对生殖支原体MgPa基因的保守片段(1 414 ～1 561bp),利用Primer express 3.0设计引物及探针,巢式PCR扩增临床样本,纯化后克隆到载体,制备阳性标准品.优化PCR反应条件,研究其特异性、灵敏性和重现性. 结果 构建了含MgPa基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在101 ～ 109拷贝数之间有较好的线性关系.该方法检测阳性率高达15.4％,能特异性检测生殖支原体,而人型支原体、解脲脲原体、沙眼衣原体等检测为阴性;灵敏度高,可检测到10个拷贝数;3组重复试验的变异系数均小于3％.结论 本研究建立了生殖支原体的快速检测技术,具有检测阳性率高、特异性强、灵敏度高、重现性好等特点.