以dotA基因为靶标的LAMP法快速检测嗜肺军团菌

目的 建立一种简便、高效、特异、灵敏的快速检测军团菌肺炎致病原-嗜肺军团菌的方法.方法 本研究分析了NCBI数据库中嗜肺军团菌ⅣB型分泌系统的序列,经过筛选建立了以dotA基因为靶标的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测法.为了验证该法的特异性,提取了约旦军团菌、马氏军团菌、沙门菌、不同血清型的嗜肺军团菌基因组DNA进行检测;为了验证该法的灵敏度,对梯度浓度的阳性模板进行了检测,并与普通PCR对比;最后还将该法实际应用于环境水样的检测.结果 本法可于30 min内完成扩增;扩增产物电泳呈现LAMP特有的梯形条带,酶切产物的片段大小符合理论值;阳性产物中可见白色沉淀,加入溴乙锭后在紫外光下可见明亮的荧光,阴性产物无此现象.结论 该dotA-LAMP嗜肺军团菌检测法的特异性好,灵敏度高于普通PCR,可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏、直观地检测出嗜肺军团菌,具备现场检测及基层推广的应用潜力.