Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究
cnki（2016）
摘要
目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT（野生型Smad3基因）、Smad3 EPSM（Smad3L区磷酸化位点突变）、Smad3 3S-A（Smad3C区磷酸化位点突变）3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G0/G1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。
更多关键词
Smad3 WT质粒,Smad3 EPSM质粒,Smad3 3S-A质粒,Hep G2细胞,稳定转染,细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡,
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