胰岛素受体-1在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应

本试验旨在研究胰岛素受体-1(IR-1)在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应.利用PCR扩增的方法从尼罗罗非鱼肌肉中克隆IR-1的cDNA片段,并通过半定量PCR检测,比较IR-1在肌肉、肝脏和心脏中的表达差异.选取体重约为100 g的尼罗罗非鱼160尾,随机分2组,每组4个重复,每个重复20尾.试验组腹腔注射葡萄糖(每100 g体重30 mg),对照组以相同剂量腹腔注射0.7％的无菌生理盐水.在注射前(0 h)和注射后的1、3、6和12h分别进行采样,测定血浆葡萄糖和胰岛素含量,并通过实时荧光定量PCR检测IR-1在肌肉、心脏和肝脏中的mRNA相对表达量.结果显示:1)克隆出的IR-1 cDNA片段,其GenBank登陆号为JN967750,大小为1979 bp,编码548个氨基酸.序列分析发现,尼罗罗非鱼的IR-1与其他物种比较具有很高的保守性,并具有丰富的酪氨酸激酶特征性序列.2)IR-1在尼罗罗非鱼肌肉、心脏和肝脏中均有较高的表达量,其中在肝脏和肌肉中的表达量基本一致,而在心脏中的表达量相对较低.3)试验组血浆葡萄糖含量在注射葡萄糖1h后达到最高,并显著高于对照组(P<0.05),而后开始下降,3h后恢复到正常水平;试验组血浆胰岛素含量在葡萄糖注射3h后达到最高,并显著高于对照组(P<0.05),而后开始下降,12 h后恢复到正常水平.试验组肌肉和肝脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后6h时达到最高,显著高于对照组(P<0.05),在12 h时恢复到正常水平;试验组心脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后的12 h内没有发生显著变化(P>0.05).结果表明,注射葡萄糖后即刻升高了尼罗罗非鱼的血浆葡萄糖含量,相对于血浆葡萄糖含量的升高,血浆胰岛素含量的升高相对延迟,而肌肉和肝脏中IR-1 mRNA相对表达量的提高又延迟于血浆胰岛素含量的升高,从而加重了尼罗罗非鱼对葡萄糖的代谢负担.