鸡IGFBP2基因3'UTR区1196C＞A单核苷酸多态性的功能性鉴定及分析

鸡IGFBP2基因3'非编码区(3'UTR) 1196C＞A单核苷酸多态性(SNP)与鸡的腹脂重和腹脂率显著相关.生物信息学分析显示,该SNP恰好位于gga-miR-456-3p的一个潜在靶基因结合位点处,提示IGFBP2基因可能是gga-miR-456-3p的一个靶基因,且该SNP位点可能影响gga-miR-456-3p对IGFBP2基因表达的调控作用.为鉴定SNP 1196C＞A是否为功能性SNP,本研究分别构建了包含该SNP位点C或A等位基因的双荧光素酶报告基因载体,比较分析这两个等位基因在鸡胚成纤维细胞系(DF1)和鸡前脂肪细胞中对报告基因活性和表达的影响;利用miRNA mimics和inhibitor分析gga-miR-456-3p对不同等位基因报告基因活性以及内源性IGFBP2表达的影响.结果发现,在DF1细胞和鸡前脂肪细胞中,A等位基因的报告基因活性和表达均显著高于C等位基因(P＜ 0.05); gga-miR-456-3p仅影响C等位基因的报告基因活性和表达,而对A等位基因的报告基因活性没有明显影响;gga-miR-456-3p调控细胞内源性IGFBP2基因的mRNA和蛋白质表达.本研究证实IGFBP2基因是gga-miR-456-3p的靶基因,其3'UTR区SNP 1196C＞A是一个功能性SNP,它影响gga-miR-456-3p对鸡IGFBP2基因的表达调控作用.本研究结果对于鸡的分子辅助选择育种及IGFBP2基因在脂肪沉积中调控机制的阐明具有重要意义.