柴胡皂苷d对自身免疫性肝炎小鼠差异表达基因CTLA-4、IL-10和IL-17的影响

目的 ·选用Agilent-085631芯片筛选自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠差异表达基因,并观察柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SS-d)对部分差异表达基因的影响,探讨SS-d治疗AIH的作用机制.方法 ·健康雄性SPF级C57BL/6小鼠40只,分为芯片组(n=8)和SS-d治疗机制组(n=32).芯片组分为正常组和模型组[按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)](每组n=4),12h后处死,进行肝脏差异表达基因的筛选,并采用qRT-PCR技术对部分基因进行验证.SS-d治疗机制组分为正常组、模型组(处理同芯片组)、SS-d低剂量组和SS-d高剂量组(参照文献及预实验结果,分别按2.5和5.0 mg/kg剂量腹腔注射SS-d,8h后按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)(每组n=8).12h后收集小鼠静脉血及肝脏总蛋白、总RNA,采用ELISA法检测血清谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)及白介素(interleukin,IL)-10、IL-17的含量,Western blotting检测细胞毒T淋巴细胞相关抗原(cytotoxicT lymphocyte-associated antigen,CTLA)-4蛋白的表达量,qRT-PCR技术检测IL-10、IL-17和CTLA-4 mRNA表达量.结果 ·共筛查差异表达基因11 512个(上调5 189个,下调6 323个),与138条信号通路相关;差异表达基因IL-10、IL-17及CTLA-4的qRT-PCR检测结果与芯片筛查结果一致.与正常组比较:模型组小鼠血清GPT、GOT含量升高;IL-17 mRNA表达量升高,IL-10 mRNA和CTLA-4 mRNA表达量降低;血清IL-17含量升高,血清IL-10含量降低,肝组织CTLA-4蛋白表达量降低.与模型组比较:SS-d低剂量组和SS-d高剂量组小鼠血清GPT、GOT含量降低;IL-17 mRNA表达量降低,IL-10 mRNA和CTLA-4 mRNA表达量升高;血清IL-17含量降低,血清IL-10含量升高,肝组织CTLA-4蛋白表达量升高.结论 ·多条信号通路参与AIH的发病,而SS-d可通过调节IL-10、CTLA-4、IL-17的表达,改善AIH小鼠肝脏炎症反应.